一、PCR实验室平面布局
1、PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
1.1、分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
1.2、组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
2、各区的功能分别为:试剂准备区(扩增试剂的配制、分装和保存)、样品处理区(样品登记、分装;核酸提取、保存和加样)、扩增产物分析区(扩增产物的测定、结果分析、登记及报告)。
3、扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用不同的工作服,例如不同的颜色。工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出。使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
4、在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内:在生物安全柜内操作。每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
二、 PCR实验室建设规划及设计要点
1、主体结构
主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2、标准的三区分隔和气压调节
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区, 同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区Ⅰ,缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
3、消毒
在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4、机械连锁不锈钢传递窗
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。没有条件的也可采用水磨石地面,或大块的瓷砖(至少800mm×800mm)接缝需要小于2mm。
6、照明
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
7、实验室空调通风系统设计及压力控制
为避免各个实验区域间交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式。同时,要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
三、PCR实验室严格管理
1.严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门。
2.尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。
3.扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等。
4.扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。
5.完备的实验室配套设施,完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。

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