一、主动空气采样技术
在一段时间内空气收集，空气被主动吸入采样器，在营养培养基上捕获空气中的微生物。样品收集。当空气通过该装置时，空气采样器将微生物沉积到琼脂平板上。培养，琼脂板在控制温度下培养一段时间，以使微生物生长。微生物计数分析，培养后，菌落形成单位数（CFUs）被计数，表明空气中微生物污染的水平。数据分析，将CFU计数与洁净室分类的警报和行动水平进行比较，以确定污染是否在可接受的范围内。
主动空气采样包括使用机械装置在营养介质上绘制特定的空气体积以捕获空气中的微生物。主动空气采样是一种定量方法，这意味着它提供了可测量的数据，例如每立方米空气中菌落形成单位（CFU/m3）的数量。由于其精度和灵敏度，主动空气采样是无菌灌装等关键环境的首选技术，包括A级（ISO等级5）和B级（运行中的洁净室ISO等级7）洁净室。
1、主动空气采样原理
主动空气采样器的工作原理是迫使一定体积的空气穿过微生物收集表面。然后，空气采样器收集空气中存在的任何微生物、灰尘或颗粒，随后对其进行孵育和分析，以确定微生物污染的水平。
活性空气采样器的三种主要类型是切开-琼脂采样器、离心式采样器和撞击式采样器。每一个具有独特的操作机制和应用，但都有相同的基本目标：在受控环境中检测和量化空气中的微生物。
2、主动空气采样的优势
定量结果：主动空气采样提供数值数据，通常表示为CFU/m3，允许制造商评估微生物污染水平是否在可接受范围内。该数据对于法规遵从性和评估环境清洁度至关重要。适用于关键区域：此方法特别适用于A级（ISO5）等高风险环境区域，任何微生物污染都可能产生严重后果。在这些区域，保持无菌是至关重要的，主动采样提供了确保符合严格监管标准所需的精度。空气污染的准确表示：与被动空气采样（仅检测重力沉降的颗粒）不同，主动空气采样主动捕获空气中的微生物，包括那些可能在空气中停留较长时间的微生物。这使得它在无尘室等动态环境中检测实时污染更加准确和可靠。
3、主动空气采样的局限性
需要专门的设备：主动空气采样器需要机械或电气设备，这意味着该方法比被动采样更复杂，实施起来也更昂贵。该设备还需要定期校准和维护，以确保其准确性和可靠性。培训要求：操作主动空气采样器通常需要经过培训的人员来确保正确的设置、校准和样品收集。这增加了监测过程的操作复杂性。潜在的气流中断：在诸如ISO 5级区域等关键环境中，层流气流存在对于保持无菌至关重要的是，空气采样设备的存在可能会导致气流模式的中断，从而潜在地影响该区域的清洁度。需要仔细规划，以确保空气采样不会无意中引入污染风险。
二、被动空气采样（沉降板）
板位置沉降板放置在环境中，不加遮盖，以捕获空气中的颗粒。曝光，平板暴露1至4小时，使微生物在重力作用下自然沉降。培养，培养皿在控制的温度下培养，以便微生物生长。CFU计数，计数菌落形成单位（CFU）以评估污染水平。数据分析，将CFU结果与洁净室限值进行比较，如有必要展开调查。
被动空气采样，也称为沉降板采样，是一种在洁净室中常用的方法，通过将充满营养琼脂的培养皿暴露在环境中来监测空气污染。与依靠机械装置捕获空气中微生物的主动空气采样不同，被动采样依靠重力，使空气中的颗粒和微生物在设定的时间内自然沉降到琼脂板表面。这种技术简单，成本效益高，并提供了对环境微生物负荷的一般了解。虽然它不像主动空气采样那样敏感或定量，但它仍然广泛应用于不需要连续、高灵敏度监测的非关键环境中。沉降板的用例沉降板广泛用于C级和D级环境的洁净室（相当于ISO7和ISO 8）。在这些区域，微生物污染风险低于更高级别的洁净室，如A级（ISO 5级）。
1、被动空气采样（沉降板）的优点
不需要复杂的设备：与主动空气采样器不同，沉降板不需要机械设备，电力或校准。这种简单性使该技术易于使用，降低了前期成本和维护费用。易于实施：经过基本微生物学培训的人员可以轻松放置和处理沉淀板，简化采样过程。沉淀板可以长时间暴露（长达4小时或更长时间），允许空气中微生物的累积收集。这一特性使它们在识别随时间推移的污染趋势方面非常有用，因为它们可以捕获在暴露期间逐渐沉淀的颗粒。这种长时间的暴露期提供了对长期污染风险的洞察，特别是在微生物水平全天可能因人员流动、暖通空调操作或其他因素而波动的地区。
2、被动空气采样（沉降板）的局限性
灵敏度有限：沉淀板依靠微生物在重力作用下自然沉降到琼脂表面。因此，它们可能会错过长时间在空气中停留的小而轻的颗粒或微生物，特别是在气流控制的洁净室中。结果通常是定性的或半定量的。虽然可以计算培养皿上生长的菌落数量，但采样空气的实际体积是未知的，因此很难将结果转化为每立方米CFU (CFU/m3)，这是主动空气采样中使用的标准度量。严重依赖局部空气运动：沉降板特别容易受到洁净室气流模式的影响。例如，具有层流气流的区域（旨在将污染物从关键区域推开）可能导致较少的微生物沉降在板上，即使它们仍然存在于空气中。相反，具有湍流气流的区域可能由于颗粒沉降增加而显示出人为的高污染水平。这使得沉淀板的数据在高风险区域不太可靠，例如A级（IsO 5级区域），这些区域需要精确的微生物监测来保持无菌。在这样的区域，主动空气采样更适合于实时检测污染。
三、表面取样方法（接触板和拭子）
表面采样是洁净室环境监测的关键组成部分。采样是为了确保受控环境中的表面没有有害水平的微生物污染，特别是在清洁和消毒之后。表面取样的结果确认了清洁和卫生程序的有效性，并验证了洁净室环境符合安全产品制造所需的微生物限度。用于表面取样的两种主要方法是接触板（RODAC板）和拭子。每种方法都有其独特的应用和好处，这取决于被采样的表面类型。
1、接触板（RODAC板）
RODAC（复制生物检测和计数）板是一种广泛使用的表面采样工具。这些盘子含有营养琼脂的凸面，直接压在平面上转移任何存在于表面的微生物转移到琼脂上。一旦培养皿被培养，任何出现的微生物菌落都清楚地表明表面受到了污染。
优势：直接接触：接触板提供与表面的直接接触，使微生物容易转移到琼脂培养基上。定量分析：该方法提供定量结果，例如每平方厘米表面的菌落形成单位（CFU）数量。即用型：它们是市售的，并且预先准备了生长介质，使它们易于使用并节省时间。较少的劳动密集型：所需的样品制备最少，降低了污染和处理错误的风险。标准化：该方法在制药行业被广泛接受和标准化，适用于常规监测。
局限性：仅限于平坦表面：接触板最适合平坦、光滑的表面，限制了它们在不规则或难以到达的区域的使用。残留的可能性：取样过程中施加的压力可能会在表面留下残留的介质，这可能会影响关键或无菌区域。样本量：接触面积限于板材表面，一般为25cm2，可能不能代表更大的面积。回收率可变性：微生物回收率可根据表面条件而变化，如粗糙度、湿度或清洗剂。
2、拭子
拭子是表面采样的另一种重要方法，特别是对于难以触及的区域或无法使用接触板采样的表面。无菌拭子，用合适的中和剂或缓冲液润湿，用于从不规则表面（如设备内部、格栅或缝隙）收集微生物。
优势：通用性：拭子适用于不规则，小，或难以触及的表面，如角落或设备裂缝。更大的取样面积：与接触板相比，拭子可用于取样更大或更复杂的区域。有利于残留物检测：除了微生物，它们还允许收集残留物，使它们适用于清洁程序的验证。媒介传播的风险更小：与接触板不同，棉签不会在表面留下残留物，使它们适用于敏感环境。
局限性：劳动密集型：抽拭法更需要劳动密集型，因为它需要仔细取样、提取和电镀。较低的定量精度：拭子结果定量较少，更容易发生变异性，特别是当评估微生物负荷。不一致回收的可能性：微生物的回收可能因技术、压力和表面质地而异。污染风险：与接触板相比，处理和准备步骤会带来更多的污染机会。
四、人员抽样方法（指板和袍板）
人员取样是洁净室环境监测的重要组成部分，特别是在无菌生产环境中，人类操作人员往往是微生物污染的最大来源。尽管有严格的更衣程序，操作人员仍然可以通过他们的手套、衣服和身体将微生物引入关键环境，潜在地损害洁净室或产品的无菌性。进行人员抽样以评估更衣程序的清洁度和有效性，确保操作人员在整个生产过程中保持足够的无菌性。人员取样的两种主要方法是指盘和长袍盘，这两种方法都有助于监测操作人员身体和防护服上的微生物污染情况。
1、人员抽样的优点
直接监控作为污染源的人员：人员通常是洁净室的主要污染源，手指和长袍板提供了人员是否保持无菌的直接证据。这在无菌环境中尤其重要，在无菌环境中，人员引入的任何污染都可能产生严重后果。
对无菌环境至关重要：人员取样在A级（ISO 5级）环境中至关重要，而保持无菌对于防止无菌产品的污染至关重要。手指和长袍板提供关键数据，说明操作人员的手套和服装在关键操作期间是否未被污染。
礼服程序的验证：礼服牌有助于确保礼服程序的有效性。通过测试操作人员的工作服表面是否有微生物污染，设施可以验证他们的换衣程序是否正确执行，并且工作人员没有将污染物引入洁净室。
2、人员抽样的局限性
操作后执行：通常在关键操作完成后进行人员抽样，这意味着如果检测到污染，可能为时已晚，无法采取纠正措施。这可能导致产品批次受损或需要额外的测试或清洁。
取样区域有限：指板和衣板只取样手套或服装的小的、特定的区域。这意味着未取样区域的污染可能会被遗漏。因此，可能需要多个样本来提供对操作人员身体和服装的全面监测。
依赖于适当的技术：人员抽样的准确性和有效性取决于抽样技术的正确执行。如果操作者没有将手指或长袍充分压在琼脂板上，或者如果采样区域没有精心选择，则结果可能无法反映真实的污染水平。
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