一、PCR实验室的净化级别
PCR实验室虽没有严格的净化要求,但采用全送全排的气流组织形式对PCR实验来说更为适宜,如此可避免集中回风后再循环可能造成的空气交叉污染。各个试验区及其对应的缓冲间设置为II级,整体缓冲走廊设置为IV级。
二、 PCR 实验室的设计参数
PCR实验室各个试验区及其对应缓冲间设计为II级,换气次数应至少为12 次/每小时,整体缓冲走廊设计为IV级,换气次数至少为8次/小时;冬季室内状态点温度设计为22℃,室内状态点湿度设计为60%;夏季室内状态点温度设计为26℃,室内状态点湿度设计为40%;PCR 实验室区域的噪音统一设计为≤60dB (A)。
三、PCR实验室的压差设计
由于PCR实验室各房间的用途各不相同,在设计时需根据各房间的功能及房间内布置的实验设备确定其压差,并以其为基准调整送风量和排风量。负压房间的压差设计为≤-5Pa,正压房间的压差设计为≥+5Pa。
(1)试剂储存和准备区
该区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。由于该区实验操作均在微环境百级的超净工作台内进行,应设计成微正压房间(通过控制送风风量大于排风风量达到正压效果),以防止外界含有核酸气溶胶的空气进入而造成污染。排风量设计为9次/h。
(2)标本制备区
该区主要进行的操作为样本的保存、RNA和DNA的提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定DNA的合成。同样的,为了防止外界含有核酸气溶胶的空气进入而造成污染,该区应设计成微正压房间。另外,此区域设有生物安全柜,设计时应加大送风风量以满足该区的正压需求。排风量设计为9次/h (若未达到生物安全柜最大排风量,则以生物安全柜最大排风量设计为房间排风量)。
(3)扩增反应混合物和扩增区
该区主要进行的操作为DNA的扩增、已经制备完成的DNA模板(来自于标本制备区)的加入和主反应混合液(来自于试剂储存和准备区)制备成反应混合液。为防止大量扩增产物扩散出该区并对其他房间造成污染,该区应设计成微负压房间(通过控制送风风量小于排风风量达到负压效果)。排风量设计为15次/h。
(4)扩增产物分析区
该区主要进行的操作为扩增片段的测定。为避免在电泳测序的过程中扩增产物从本区扩散到其他区域,该区应同样设计成微负压房间。由于此区域的分析仪散热量较大,会设置生物安全柜辅助排风,设计时应保证在不超过排风风量(满足该区的负压需求)的情况下适当加大送风风量。排风量设计为15 次/h (若未达到生物安全柜最大排风量,则以生物安全柜最大排风量设计为房间排风量)。
(5)各功能房间对应的缓冲间
PCR实验室各功能房间对应的缓冲间设计成微正压,以减少实验区内外的空气交换。整体缓冲走廊设计成微正压。
四、PCR实验室的设计方法
1)PCR实验室净化空调系统采用全送全排的气流组织形式,以下将仅针对此种方案进行设计和阐述。整个PCR实验区(包括整体缓冲走廊)设置一台形式为全新风的净化空调机组。该净化空调机组的功能段依次为:预热段——冬季空调计算干球温度为-9.9℃,低于0℃,设置预热段可以防止风机因结冻对使用造成影响,预热至5℃即可,预热方式采用电预热(无条件时可采用热水进行预热);风机段——根据新风量计算风机功率;均流段;中效过滤段;亚高效过滤段;加热段、表冷段——净化空调机组采用四管制,接大楼设计预留PCR实验区设备机房净化用冷、热供回水管,过渡季冷源由大楼预设风冷螺杆冷水机组(与其他净化区共用)提供;电再热段:加湿段——采用干蒸汽加湿的方式,加湿用蒸汽由大楼系统提供(无条件时可采用不滋菌、不污染的洁净电热式加湿器,加湿用水接大楼水系统给水管);出风段。
2) PCR实验区采用上送风、下排风的气流形式,每个房间顶部设置带有手动调节阀和H13级别高效过滤的送风口;正压房间下侧设置带有手动调节阀和H8级别中效过滤的排风口和静压箱;负压房间下侧设置带有手动调节阀和H13级别高效过滤的排风口和静压箱;每个生物安全柜设置带有H13级别高效过滤的排风口。试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物和扩增区和扩增产物分析区各单独设置一台排风机,方便房间内压差的调节与控制,且能避免实验过程中出现交叉污染的情况。整体缓冲走廊和四个缓冲单间共同设置一台排风机。标本制备区、扩增产物分析区均设置有生物安全柜,房间内的排风口和生物安全柜排风口改为安装电动调节阀,并与对应的排风机的电动调节阀联锁,通过弱电专业设计远程控制使房间内的压差稳定。
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