每个洁净室必须有各自文件形式的规定及工作步骤。下面提到的一般性规定，适用于所有的洁净室，而不专门考虑在某一特定洁净室内进行的特定工作步骤的具体特点，也没有考虑洁净设备和洁净服装的状况。
1、洁净室内只能有必要人员，室内人员越多，污染水平越高。
2、只允许经过培训的人员在洁净室工作，只有那些具备特定工作所需技能的人员，才允许进入洁净室。
3、不允许工作人员将任何可能产生污染的东西带入洁净室。只有洁净室内工作所必须的物品，才允许带入并且准备这些 时，要采取防污染措施。洁净室内不允许有下述物品： 食品、饮料、糖果、口香糖 、瓶瓶罐罐（非用品） 、香烟、烟斗、鼻烟 、收音机、唱片机、袖珍录音机 、用木材、橡胶、纸、皮革、棉花及其他天然材料制成的物品 、非洁净室专用纸、包括报纸、杂志、书籍、纸巾 、含铅铅笔和橡皮可释放粒子的书写用品，比如纤维笔 。
4、须随手关门。开门会使室内压力降低，这会造成洁净室气流的不良运动。
5、开关门的动作都要慢。快速关门会增加从洁净程度较低区域流入洁净室的空气量。为控制开关门的速度，可以在门上安装闭门器或弹簧。
6、通过气闸的两扇门时，只有在第一道门完全关闭后，再打开第二道门。所谓的联锁装置就是使两道门不能同时打开。
7、不通过更衣室就无法进入更衣室。更衣不仅仅用于更衣，它也是洁净程度较低的外部区域与洁净程度较高的内部生产区域之间的缓冲区。不得使用像紧急出口一类的、可以从生产区直接到达外部洁净度较低区域的出口，这种出口可能会造成污染物从外部空气到洁净室内部空气间的迅速转移。
8、洁净室应永远保持清洁整齐。不整齐的洁净室绝不会洁净。
9、相对生产工艺而言，人员应处在正确的位置。比如，斜靠在产品上是不好的习惯，因为这会使洁净服上的“死”粒子和微生物粒子掉落爱产品上节长品的周围。在单向流中工作的人员，不能直接坐在单向流中，因为这会使气流将服装沙锅内松散粒子吹落到空气中。对洁净室中采用的工作方法，事先认真作好计划，才能使污染的风险降至最小。
10、应认真考虑产品的移动方法或其他的空话子方法。遥控操作方法较可取，因为它不需要搬运产品。洁净室工作常常使用手套，但手套也可能成为污染源。
11、在洁净室内移动物品时，不得使该物品与服装或其他物品接触。
12、在靠近产品的位置工作时，应避免讲话。即使使用口罩，从鼻和嘴散发出的粒子仍有穿过或饶过面具而接触产品的危险。如果打喷嚏或咳嗽无法避免，就应当避开产品。打完喷嚏或咳嗽之后，应更新面罩。面罩应能把嘴鼻都罩住。
13、避免接触洁净室的表面。即使洁净室本身是洁净的，洁净室内的表面和设备表面仍可能是受到污染的。戴着手套的手要离开洁净服，以降低污染手套的危险。
14、应定期清洗洁净室手套，以减少接触传播污染物的风险。手套清晰可以使用经过过滤的70%浓度的乙醇或异丙醇。这两种酒精都可以使用，以为它们挥发后均无残留物。
15、洁净室使用的抹布只能用一次或只能按事先定好的次数使用，并应在用完以后抛弃。用抹布进行清洁时，应使用又长又直的动作，动作 与动作之间有重叠。
16、在洁净室工作，应使用平稳、认真考虑好的动作。快速凌乱的动作会使室内悬浮粒子浓度大大增加。
17、留在洁净是内的产品应放在密封柜中或放在瓶内，以使物品或产品与污染物接触的风险降至最小。最好的办法是将其保存在层流工作台或安全工作台中。
18、废弃的物品应放入专门设计的容器内，然后定期移出室外。
19、应使用合适的方法，对洁净室进行洁净，有的情况下还要对洁净室进行消毒。
20、进入洁净室的人必须知道他的责任，并受过各中洁净室专业技能的专门培训，懂得洁净室内所有系统的功能。
21、发生重大事故时，比如洁净室内外发生火灾、爆炸、断电等，所有人员应快速有地行动。出现紧急情况，比如打破了有毒的或无毒的材料，有个别员工不适，或其他类似情况等，员工都应知道任何行动，并保持镇定。
22、进入洁净室的人员，必须对其穿着的洁净服有足够的知识。
23、所有在洁净室工作的人员，不论其工作内容如何，必须穿着适当的洁净室服装。
24、用于无菌生产的洁净室灭菌工作服，未经洗涤和再灭菌不得再次使用。
25、在灭菌区工作的人员，必须完全了解并遵守各种灭菌、消毒步骤。
26、在洁净室工作的人员，不得返回气闸室。
27、在气闸室中，应放有塑料袋，可将洁净服放入袋中以便隔离和运输。这样，就可以将用过的洁净服输送到洗涤区，而没有污染产品或人员的危险。
28、从整个系统的舒适性和有效性出发，决定一次可进入气闸室人员的数量。
29、钱包、手袋等个人物品不得带入洁净室或气闸室。
30、身体不适的人员，特别是腹部、鼻、喉咙不适者，不应进入洁净区。
31、所有与洁净室外人员的语言沟通，全部都要通过内线电话或内部通讯系统进行。决不能把气闸室和通道当中洁净室与生产区外沟通的通道。
32、洁净室内禁止使用化妆品、戒指、首饰和表。
33、将量杯、烧瓶及其他用品带入洁净室前，必须按照既定步骤进行清洁与灭菌。
34、洁净室内只能使用长纤维制作的抹布，目前使用最广泛的是合成材料抹布。传统的家用拖布、刷子及其他物品，决不能用于洁净室。
35、人员卫生，特别是手与口腔的卫生，对于洁净室的良好工作效果是最重要的。